熒光定量的定量方法

絕對定量：是用一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同的條件下目的基因測得的熒光信號量同標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而得到目的基因的量。

相對定量：是通過與內(nèi)參基因Ct值之間的相差來計算表達(dá)基因的差異，也稱之為2-??Ct。

熒光定量擴(kuò)增曲線

隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，擴(kuò)增產(chǎn)物不斷累積，熒光信號強(qiáng)度不斷增加，每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一次熒光信號，通過熒光信號強(qiáng)度的變化檢測擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，從而到擴(kuò)增曲線圖

縱坐標(biāo)：Rn（熒光值）     橫坐標(biāo)：Cycle（循環(huán)數(shù)）

熒光定量PCR檢測技術(shù)路線

樣本要求

1.基因信息: 客戶提供盡可能詳細(xì)的背景信息；物種信息，基因名稱，樣本數(shù)等。

2.RNA樣本：RNA質(zhì)量要求260/280吸光度值≥2.0，瓊脂糖電泳帶型不彌散；濃度要求：≥50ng/μl；體積：≥20μl。1.5ml或者2.0ml離心管管口用封口膜密封；96孔PCR板，必須用硅膠蓋或者定量PCR的膜密封；寄樣時需將樣本固定，用泡沫等物品把寄樣箱子空間填滿；不可使用錫箔紙和保鮮膜封口。

3.常規(guī)動物組織：需保存在1.5ml或2.0ml離心管，液氮速凍5min以上，放置于-80℃保存，送樣時干冰保存郵寄。

4.軟體動物組織：沖洗干凈淤泥之后液氮速凍干冰保存郵寄。送樣量：200mg-2g

5.細(xì)胞樣本：細(xì)胞數(shù)10⁶以上

6.不推薦提供RNA或cDNA樣品，除非您能充分證明所提供RNA/cDNA是高質(zhì)量的且可用于熒光定量PCR。